Оборудование: микроскоп, камера Горяева, пипетка, капилляр от гемометра Сали, пробирка с резиновой крышкой.
Реагенты: жидкость Тюрка (100 мл 5%-го р-ра уксусной к-ты и 1 мл 1%-го р-ра генциан фиолетового или метиленового синего), спирт, иммерсионное масло.
Камера Горяева – толстое предметное стекло с четырьмя желобами в средней части, между которыми находятся три узкие площадки, средняя из которых ниже боковых на 0,1 мм и разделена пополам поперечным желобком. По обе стороны от этого желобка расположены сетки, нанесенные на стекло. Сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов, из которых 25 расчерчены вертикальными и горизонтальными линиями на 16 малых квадратов. Подсчет лейкоцитов ведут в счетной камере Горяева под малым увеличением микроскопа в 100 неразграфленных больших квадратах. Большой квадрат равен 16 малым, что соответствует 100 х 16 = 1600 малым квадратам. Единицей отсчета является маленький квадрат. Его сторона равна 1/20 мм, площадь 1/20*1/20=1/400 мм 2 . Объем крови, помещающейся над маленьким квадратом, равен 1/400 мм 2 *1/10 мм=1/4000 мм 3 (1/10 мм – высота слоя крови). из 225 больших квадратов
Ход работы. Покровное стекло притереть к камере Горяева до появления радужных колец.
Установить увеличение микроскопа в 280 раз (окуляр на 7, объектив на 40). Поставить камеру на предметный столик микроскопа, найти сетки, рассмотреть.
Пипеткой взять 0,4 мл жидкости Тюрка (5%-ый раствор уксусной кислоты, подкрашенный метиленовым синим) и влить в пробирку.
Набрать кровь в капилляр от гемометра Сали до отметки (0,02 мл); кончик капилляра вытереть ватой; опустить капилляр в пробирку с жидкостью Тюрка; выдуть кровь в пробирку; промыть капилляр, дважды выдувая этот раствор разбавителя. Пробирку закрыть резиновой пробкой, перемешать содержимое. Набрать содержимое пробирки в капилляр. Каплю из капилляра выпустить на среднюю пластинку под притертое покровное стекло к камере Горяева (пузырьки воздуха не должны попасть под покровное стекло). Оставить на 1 мин., чтобы осели клетки крови.
Подсчитать количество лейкоцитов в 100 больших квадратах (или 1600 малых квадратах). Учитывают клетки, находящиеся внутри каждого малого квадрата, на левых и верхних сторонах каждого квадратика. Не считают на нижних и правых сторонах квадрата, т.к. их число учитывается при подсчете лейкоцитов следующего квадрата.
Х=(А*4000*20)/1600, где
А – количество лейкоцитов в 100 больших квадратах,
4000 – коэффициент для приведения объема к 1 мм 3 (1/4000 мм 3 – объем одного маленького квадрата),
20 – коэффициент разведения крови объемом 0,02 мл,
1600 – количество маленьких квадратов.
Практически для получения действительного содержания лейкоцитов в 1 мкл крови достаточно полученное при подсчете число разделить пополам и приписать 2 нуля (или подсчитанное число клеток крови разделить на 50), ошибка метода составляет ± 7%.
Например, подсчитано 160 лейкоцитов, тогда в абсолютных единицах получаем 8 000 клеток в 1 мкл крови. Для пересчета количества клеток в 1 л (система единиц СИ) необходимо результат умножить на 10 6 , т.е. 8 000*10 6 = 9*10 9 /л.
Оформление работы. Записать или зарисовать последовательность счета клеток в камере Горяева. Подсчитать количество клеток, записать.
Работа 5. Приготовление мазков крови , окрашивание по Романовскому-Гимзе
Оборудование: обезжиренные предметные и шлифовальные стекла, вата, пинцет, пипетка на 10 мл, глазные пипетки, ванночки размером с предметное стекло, карандаш.
Реагенты: кровь рыбы, 70 % этиловый спирт,
В основе методики лежит способность смеси основных (азур II) и кислых красителей (водорастворимый желтый эозин) окрашивать элементы клеток крови в разные цвета и оттенки. Окрашиватся ацидофильные образования в различные оттенки красного цвета, базофильные - в цвета от пурпурного до синего.
Ход работы. Обезжирить предметные стекла
Предметное стекло взять в левую руку между большим и указательным пальцами за короткие грани.
Каплю крови (величиной с зерном пшена) нанести на правый конец стекла (предметным стеклом, углом шлифовального стекла, пипеткой). Капля должна быть такого размера, чтобы конец мазка, приготовленного из нее, не доходил на 1 см до края стекла.
Шлифовальное стекло ставят под углом 45º к основному стеклу у правого края предметного стекла, надвигают на каплю крови так, чтобы у нижнего ребра шлифовального стекла равномерно распределилась капля крови. Распределяют справа налево каплю крови по предметному стеклу равномерно, быстро. Мазок должен быть тонким, ровным, желтоватым, просвечивающимся и отливать должен цветами радуги при просмотре на свет.
А – неравномерный мазок на плохо обезжиренном стекле; Б – короткий мазок; В – длинный и неравномерный мазок; Г – толстый в начале мазок; Д – правильный мазок.
Рисунок 2. Качество приготовленного мазка.
Высушить мазок быстро (под лампой, в термостате, высоко над спиртовкой).
Промаркировать простым карандашом.
Фиксировать в закрытой кювете в этиловом спирте 5 мин., высушить на воздухе.
На дно ч.Петри налить готовую краску Романовского, препарат уложить мазком вниз в краску, закрыть крышкой от ч.Петри (закрытая чашка Петри с увлажнённым фильтром на дне). Мазки окрашивать 20 - 25 минут во влажной камере в термостате при 37 °C.
После окрашивания мазки промыть в проточной воде, сушить на воздухе и исследовать при масляной иммерсии.
Оформление работы. Записать последовательность методики окрашивания.
Оснащение : средства индивидуальной защиты, исследуемый материал материал, лоток, микроскоп, камера Горяева, пастеровские пипетки, штатив с пробиркой, дозаторы с наконечниками, салфетки, контейнеры с дез.растворами.
Реактив : раствор 3% уксусной кислоты.
Алгоритм действий:
1. Вымыть и осушить руки, надеть перчатки.
2. Отмерить в сухую чистую пробирку 0,4 мл 3% уксусной кислоты.
3. Отмерить 0,02 мл цельной крови и протереть поверхность наконечника салфеткой.
4. Внести в опытную пробирку с 3% уксусной кислотой 0,02 мл цельной крови.
5. Перемешать содержимое пробирки и оставить стоять до момента счета (5 мин).
6. Подготовить камеру Горяева для подсчета лейкоцитов.
7. Перемешать перед заполнением камеры содержимое пробирки еще раз.
8. Нанести каплю разведенной крови пастеровской пипеткой на среднюю пластинку камеры у края покровного стекла.
9. Положить камеру на предметный столик на 1-2 мин, пока движение жидкости в ней не прекратится, и эритроциты не осядут. Включить микроскоп.
11. Произвести расчет лейкоцитов по формуле в 1 л крови и записать в бланк.
X= (a x 20)/(100 x b)
где X -- число лейкоцитов в 1 мкл крови; а - число посчитанных лейкоцитов; b - объем одного большого квадрата 1/250 мм3;
20 - разведение крови;
100 - число больших квадратов, в которых производился счет.
Конечная формула
X = a x 50 x 106 (в 1 Л)
12. Оценить полученные результаты с позиции «норма-патология».
13. Убрать рабочее место.
Норма-патология:
Эритроциты - норма
Лейкоциты - норма
458 - эритроциты
137 - лейкоциты
137*50*106 = 6850*106 = 6,85х103/мкл= 6,85х109/Л
Х=4,58х1012/Л
Гематология
4) Класс пролифирических клеток. Это морфологически распознаваемые клетки. Так как по морфологии отличается от предыдущих 3 классов. Имеют крупное рыхлое ядро с двумя - четырьмя ядрышкам, цитоплазма базофильна
В отличии от предыдущих клеток, бласт
5) класс созревающих клеток, характерных для своего ряда кроветворения
Здесь может быть несколько разновидностей клеток от одной до 5 в эритроцитарном ряду
6) класс зрелых клеток
Они функционируют в периферической крови, или за пределами сосудистого русла?
Название каждой клетки
Гематология
Анемии (малокровие) - представляют собой обширную группу патологических состояний и заболеваний, для которых общим признаков является снижение способности крови переносить кислород.
Анемия - группа заболеваний, общим моментом для которых является снижение концентрации гемоглобина в крови, реже при одновременном уменьшении числа эритроцитов (эритропения).
Классификация анемий:
6. По механизму развития:
1. Анемии вследствие кровопотерь.
2. Анемии вследствие усиленного кроворазрушения (гемолитические).
3. Анемии вследствие нарушенного кровообразования.
7. По типу кроветворения
1. Нормобластическое
2. Мегалобластичечкие
8. По цветовому показателю:
1. Нормохромные, когда цветовой показатель равен 0,82-1,05
2. Гипохромные, если цветовой показатель меньше 0,82
3. Гиперхромные, когда цветовой показатель выше 1,05
9. По размеру эритроцитов:
1. Нормоцитарные (с нормальным средним диаметром эритроцитов 7,2 - 8,0 мкм)
2. Микроцитарные (средний диаметр эритроцитов ниже 7,2 мкм)
3. Макроцитарные (диаметр эритроцитов более 8 мкм)
4. Мегалоцитарные (диаметр эритроцитов более 10 мкм)
5. По регенераторной активности костного мозга:
1. Регенераторные, с достаточной функцией костного мозга. Число Ретикулоцитов в периферической крови 1,0 -5,0%
2. Гипорегенераторные, с пониженной регенераторной функцией костного мозга. Количество Ретикулоцитов в периферической крови 0,2%
3. Гиперрегенераторные, с повышенной регенервторной функцией костного мозга. Количество Ретикулоцитов в периферической крови превышает 5,0%
4. Арегенераторные, с резким угнетением эритропоэза. Ретикулоциты в переферической крови, как правило, не определяются
Микроциты - преобладание в мазках крови эритроцитов с диаметром 5-6,5 мкм - наблюдают при наследственном сфероцитозе, железодефицитной анемии, таласемии. Все эти клетки имеют уменьшенный объем и меньше количество Hb. В основе изменений размеров эритроцитов лежит нарушение синтеза Hb.
Макроцитоз - преобладание в мазках крови эритроцитов диаметром более 9 мкм - выявляют при макроцитарных анемиях.
Мегалоцитоз - появляется в мазках крови эритроцитов диаметром 11-12 мкм, гиперхромных, без просветления в центре, овальной формы.
Анизоцитоз - присутствие в мазках крови эритроцитов, различающихся по размеру: с преобладанием эритроцитов малого диаметра - микроанизацитоз, с преобладанием эритроцитов большого диаметра - макроанизоцитоз.
Появляется на ранних стадиях анемии и является диагностическим признаком
Пойкилоцитоз - изменения различной степени выраженности формы эритроцитов, которая становится отличной от дисковидной. Это важнейший признак патологического изменения эритроцитов
Изменение окраски
Гематология - практика
КАМЕРЫ СЧЁТНЫЕ - приборы для подсчета форменных элементов крови, мочи и цереброспинальной жидкости, а также микроорганизмов. Предложена К. с. франц. физиологом Малассе (L. Ch. Malassez) в 1874 г.
К. с. представляют собой толстое предметное стекло с углублением, на дне к-рого выгравирована счетная сетка; над углублением накладывают шлифованное покровное стекло. Постоянная высота К. с. обеспечивается плотным притиранием покровного и предметного стекол до образования радужных ньютоновых колец (полосы интерференции).
Структурными элементами всех типов сеток являются большие и малые квадраты. Сетки различных типов - Тома, Бюркера, Предтеченского, Тюрка, Нейбауэра, Горяева, Фукса - Розенталя и др.- отличаются различным группированием больших и малых квадратов.
Известные величины - высота камеры, площадь сетки и ее делений и разведение взятой для исследования крови - позволяют высчитать количество форменных элементов в определенном объеме (1 мкл) крови (или другой среды).
Различают открытые и закрытые К. с. В закрытой камере покровное стекло притирают после ее заполнения, и при этом в нее могут попасть пузырьки воздуха. Такие К. с. (Тома - Цейсса с сеткой Тома, Дунгера с особой сеткой) неудобны в работе и не используются.
Открытые камеры (рис. 1) заполняются после притирания покровного стекла. Они имеют две сетки на одном предметном стекле. Пластинки с выгравированными сетками отграничены желобками одна от другой, а также от остальной части предметного стекла. Наличие желобков дает возможность регулировать заполнение камер. Некоторые камеры снабжены металлическими зажимами, фиксирующими покровное стекло.
Открытые К. с. впервые описал С. П. Алферов в 1883 г., затем в 1905 г. Бюркер (К. Burker). Известны открытые счетные камеры Ключарева, Гауссера и Леви, Гельбера, Глауберманна. В СССР широко применяются счетные камеры Горяева и Фукса - Розенталя. Камера Горяева с сеткой Горяева (рис. 2) имеет объем 0,9 мкл, площадь сетки 9 мм 2 . Сетка состоит из 225 больших квадратов; из них 100 - пустые, 25 - разделены каждый на 16 малых квадратов, 100 - разделены полосами.
Счетная камера Фукса - Розенталя с сеткой Фукса - Розенталя (рис. 3) имеет объем 3,2 мкл, площадь сетки 16 мм 2 , она состоит из 256 больших квадратов (квадраты, разделенные полосами, не считают).
Методика работы
Перед работой предметное стекло К. с. и шлифованное покровное стекло моют под струей водопроводной воды и насухо вытирают. Затем плотно притирают покровное стекло к камере (до появления радужных ньютоновых колец, ибо только при этом условии объем К. с. постоянен).
Содержимое пробирки перед заполнением камеры несколько раз перемешивают, затем оплавленным концом стеклянной палочки отбирают из пробирки, наклоняя ее, каплю крови и наносят на предметное стекло у самого края покровного стекла. Если одной капли крови недостаточно для полного заполнения К. с., добавляют еще каплю. Если кровь взята в смеситель, то первые капли из капилляра смесителя выпускают, а К. с. заполняют каплей из ампулы смесителя. Остатки жидкости с предметного стекла удаляют марлевым тампоном. Подсчет начинают через 3 мин. после заполнения камеры (за это время происходит оседание форменных элементов крови) под микроскопом при малом увеличении (объектив X 8, окуляр X 10 или X 15) и затемненном поле зрения (с прикрытой диафрагмой или при несколько опущенном конденсоре). Счету подлежат клетки, лежащие внутри квадрата (рис. 4). Клетки, пересеченные сторонами квадратов, считают следующим образом: если более половины клетки находится внутри квадрата, то ее считают, если вне - ее не считают. Клетки, пересекаемые линиями точно посередине, считают на двух смежных, правой и верхней, линиях квадратов и не считают на двух других. При использовании соответствующих разводящих р-ров эритроциты, лейкоциты, тромбоциты, эозинофилы, базофилы и ретикулоциты могут быть подсчитаны в камере Горяева.
Эритроциты считают в 80 малых квадратах, т. е. в 5 больших квадратах, расположенных по диагонали. Расчет проводится по формуле:
X = a*4000*200/80,
где а - количество эритроцитов, подсчитанное в 80 малых квадратах, 80 - количество сосчитанных малых квадратов, 200 - степень разведения крови, 4000 - множитель для получения содержания эритроцитов в 1 мкл крови (объем малого квадрата 1/4000 мкл). Практически количество эритроцитов, подсчитанное в 5 больших квадратах, умножают на 10 000.
Лейкоциты подсчитывают в 1600 малых квадратах (в 100 больших квадратах). Расчет проводится по формуле:
X = a * 4000 * 20 /1600,
где а - количество лейкоцитов, подсчитанное в 1600 малых квадратах, 1600 - количество сосчитанных малых квадратов, 20 - степень разведения крови, 4000 - множитель для получения содержания лейкоцитов в 1 мкл крови. Практически количество лейкоцитов, подсчитанное в 1600 малых квадратах, умножают на 50.
Тромбоциты подсчитывают в 400 малых квадратах (25 больших квадратах по диагонали сетки). Реактивами для разведения могут быть изотонический р-р хлорида натрия, различные р-ры, консервирующие тромбоциты и гемолизирующие эритроциты.
Считают тромбоциты под обычным микроскопом и с помощью фазово-контрастного устройства (см. Фазово-контрастная микроскопия) для более четкого выявления их. После разведения пробирку с кровью оставляют на 25-30 мин. для гемолиза эритроцитов. Затем содержимое пробирки повторно перемешивают и заполняют К. с., к-рую помещают на 5 мин. во влажную камеру (напр., чашки Петри с влажной ватой) для оседания тромбоцитов. Расчет проводят по формуле:
X = a*4000*200/400,
где а - количество тромбоцитов, подсчитанное в 400 малых квадратах, 200 - степень разведения крови, 400 - число сосчитанных малых квадратов, 4000 - множитель для получения содержания тромбоцитов в 1 мкл крови. Практически количество тромбоцитов, подсчитанное в 400 малых квадратах, умножают на 2000.
Количество базофилов и эозинофилов подсчитывают в камере Горяева в 1600 малых квадратах, как и лейкоциты. Практически подсчитанное количество базофилов и эозинофилов умножают на 50.
Ретикулоциты подсчитывают в камере Горяева в 80 малых квадратах, как эритроциты. Практически подсчитанное количество ретикулоцитов умножают на 10 000.
Определение общего количества клеток в цереброспинальной жидкости (см.) лучше производить в камере Фукса - Розенталя (из-за небольшого числа лейкоцитов в цереброспинальной жидкости). Подсчитывают по всей сетке (256 больших квадратов) под малым увеличением микроскопа (окуляр X 15, объектив х 8).
При очень большом количестве клеток допускается подсчет половины сетки (с последующим умножением результата на 2). Расчет проводят по формуле:
X = a*11/3,2*10,
где а - количество клеток, подсчитанное в 256 квадратах, 11/10- степень разведения, 3,2- объем камеры в мкл. Практически при подсчете в камере Фукса - Розенталя число лейкоцитов делят на 3.
В камере Горяева клетки цереброспинальной жидкости считают не менее 3 раз (также всю площадь), каждый раз заполняя камеру заново, затем берут среднее арифметическое. Расчет проводят по формуле:
X = a*11/0,9*10,
где а - среднее арифметическое количество клеток, подсчитанное по всей сетке, 11/10 - степень разведения, 0,9 - объем камеры в мкл. Практически число подсчитанных лейкоцитов умножают на 1,2.
Количественное определение форменных элементов в моче проводит в камерах Фукса - Розенталя, Горяева: подсчет эритроцитов и лейкоцитов при среднем увеличении микроскопа, подсчет цилиндров - при малом. Степень разведения мочи зависит от метода исследования (см. Моча).
Подсчет в К. с. не вполне точен. Ошибка метода составляет от 10 до 20% в зависимости от количества подсчитываемых элементов.
Уход и условия хранения
Следует предохранять камеры от загрязнения и попадания пыли на сетку. После работы камеру и покровное стекло моют под струей водопроводной воды и осторожно, но тщательно вытирают чистой салфеткой (можно марлевой). Затем завертывают в бумагу и убирают в коробку.
Библиография: Справочник по клиническим лабораторным методам исследования, под ред. Е. А. Кост, с. 22, М., 1975.
Д. Н. Ишмухаметов
Для работы необходим ы: скарификаторы, ватные шарики, спирт, эфир, счетная камера Горяева, смеситель (меланжер) для подсчета лейкоцитов, 5% раствор уксусной кислоты, подкрашенный метиленовым синим, микроскоп. Объект исследования – человек.
Проведение работы : Счетную камеру помещают под микроскопом и рассматривают сетку Горяева вначале при малом, а затем при большом увеличении. Накрывают камеру покровным стеклом, притирая его края к стеклу камеры до появления радужных колец Ньютона. Оставив камеру под микроскопом, прокалывают палец ранее описанным методом. Первую выступившую каплю крови из пальца стирают ватным тампоном. Во вторую каплю погружают кончик смесителя для лейкоцито, держат его вертикально и набирают кровь до отметки 1, следя, чтобы в капилляр не попали пузырьки воздуха. Обтирают конец капилляра фильтровальной бумагой и быстро, пока кровь не свернулась, переносят его в чашку с 5% раствором уксусной кислоты, продолжая держать смеситель вертикально. Набирают раствор до метки 11 (т.е. разводят кровь в 10 раз), после чего смеситель переводят в горизонтальное положение и кладут на стол.
Для подсчета лейкоцитов берут заполненный меланжер, зажимая нижний конец пальцем, снимают резиновую грушу и, зажав оба конца смесителя третьим и первым пальцами, в течение 1 мин перемешивают кровь. При этом эритроциты разрушаются и в поле зрения остаются только лейкоциты, точнее их ядра. Т.к. уксусная кислота подкрашена метиденовым синим, ядра лейкоцитов становятся видны отчетливее. Выпускают из смесителя на вату три капли, а четвертую наносят на среднюю площадку камеры у края покровного стекла. Капиллярными силами капля сама втягивается в покровное стекло и заполняет камеру. Излишек раствора крови стекает в желобок. Если на сетку попал воздух или на боковых площадках оказался излишек раствора, камеру следует промыть дистиллированной водой, высушить и заполнить снова. Заполненную камеру ставят под микроскоп и, если форменные элементы расположены равномерно (что является показателем хорошего перемешивания крови), приступают к подсчету. Подсчитывают число лейкоцитов в 25 больших квадратах (разделенных на 400 маленьких). Подсчет ведут в пределах маленького квадрата по рядам (от верхнего до нижнего). Во избежание двукратного подсчета клеток, лежащих на границе между малыми квадратами, применяют правило Егорова: « к данному квадрату относятся эритроциты, лежащие как внутри квадрата, так и на его левой и верхней границах; эритроциты, лежащие на правой и нижней границах, к данному квадрату не относятся». Подсчитав сумму лейкоцитов в 25 больших квадратах (что составляет 400 маленьких), находят среднее арифметическое число лейкоцитов в одном маленьком квадрате. Зная, что объем пространства камеры над одним маленьким квадратом равен 1/4000 мм 3 , умножают найденное число на 4000. Получают число лейкоцитов в 1 мм 3 разведенной крови. Умножив на величину разведения (10), получают количество лейкоцитов в 1 мм 3 цельной крови. Таким образом, формула для вычисления количества лейкоцитов следующая: Х = (Л х 4000 х 10)/400, где х – искомое числолейкоцитов в 1мм 3 цельной крови, Л – сумма лейкоцитов в 400 маленьких квадратах, 400 – число маленьких квадратов, в которых произведен подсчет, 10- разбавление крови. Затем полученное число лейкоцитов записывают в пересчете на 1 л крови, т.е. число тысяч лейкоцитов, найденных в 1 мм 3 , умножают на 10 9 .
Оформление результатов и их оценка: Записать, сколько лейкоцитов содержится в 1 л исследуемой крови. Сравнить полученные результаты с нормой. У взрослых этот показатель составляет 6-8 тыс в 1мм 3 или (6,0 - 9,0) х10 9 .
Конец работы -
Эта тема принадлежит разделу:
Учебно-методические материалы по II модулю
Одесский национальный медицинский университет.. кафедра физиологии.. учебно методические материалы..
Если Вам нужно дополнительный материал на эту тему, или Вы не нашли то, что искали, рекомендуем воспользоваться поиском по нашей базе работ:
Что будем делать с полученным материалом:
Если этот материал оказался полезным ля Вас, Вы можете сохранить его на свою страничку в социальных сетях:
| Твитнуть |
Все темы данного раздела:
Система крови
Конкретные цели:
1. Знать состав и функции системы крови, механизмы ее регуляции на основе анализа параметров гомеостаза (объема крови, кислотно-основного равновесия, осмо
Общая характеристика системы крови. Исследование функций и Физико-химических свойств крови
Мотивационная характеристика темы.Знание состава крови и механизма поддержания ее основных констант необходимо ля понимания роли крови как внутреннй среды организма, обеспечивающей
Методика получения крови для анализа у человека
Для работы необходимы: скарификаторы, ватные шарики, спирт, эфир. Объект исследования–человек.
Проведение работы: Для получения не
Методика определения объемного соотношения форменных элементов и плазмы (гематокрита)
Для работы необходимы: скарификаторы, ватные шарики, спирт, эфир, 4% раствор цитрата натрия, центрифуга, стеклянные градуированные капилляры. Объект исследования–
Методика определения наличия и количества белка в плазме крови
Для работы необходимы: плазма крови, 4% раствор цитрата натрия, рефрактометр, дистиллированная вода, таблица Рейса. Объект исследования–человек.
Методика исследования буферных свойств сыворотки крови по Фриденталю
Для работы необходимы: образцы сыворотки крови, разведенные в 10 раз; дистиллированная вода; 0,1н раствор НCl; 0,01 н раствор КОН; индикаторы - фенолфталеин, метилоранж; 4 мерных с
Методика приготовления мазка крови и изучение его под микроскопом
Для работы необходимы: скарификаторы, ватные шарики, спирт, эфир, предметные стекла. Объект исследования–человек.
Физиология эритроцитов и гемоглобина
Мотивационная характеристика темы.Знание функций эритроцитов, гемоглобина и их осмотической резистентности необходимо для понимания роли крови как внутреннй среды организма, обеспе
Методика подсчета эритроцитов крови в счетной камере Горяева
Для работы необходимы: скарификаторы, ватные шарики, спирт, эфир, счетная камера Горяева, смеситель (меланжер) для подсчета эритроцитов, 3% раствор натрия хлорида, микроскоп. Об
Методика вычисления цветового показателя крови
Методика определения скорости оседания эритроцитов (СОЭ)
Для работы необходимы: скарификаторы, ватные шарики, спирт, 5% раствор цитрата натрия, капилляр Панченкова, штатив Панченкова, часовое стекло или пробирка Видаля. Объект исследо
Методика определения осмотической устойчивости эритроцитов
Для работы необходимы: штатив с 18 пробирками, растворы хлорида натрия убывающей концентрации 0,9%, 0,85%, 0,8% и т.д. до 0,1% раствора), пробирка с дистиллированной водой, пробирк
Методика определения среднего содержания гемоголобина в одном эритроците (СГЭ)
Для работы необходимы: полученные ранее показатели уровня гемоглобина и количества эритроцитов образца анализа крови. Объект исследования–человек.
Исследование защитных свойств крови. функции лейкоцитов. Понятие про иммунитет, его виды
Мотивационная характеристика темы.Знание защитных свойств крови, функций лейкоцитов необходимо для понимания механизмов иммунологических реакций в изменяющихся условиях окружающей
Методика подсчета лейкоцитарной формулы в мазке крови
Для работы необходимы: приготовленный ранее мазок крови, окрашенный по Романовскому-Гимза, микроскоп, иммерсионное масло. Объект исследования–человек.
Виды и механизмы гемостаза. Физиология тромбоцитов
Мотивационная характеристика темы.Знание гемостатических свойств крови, функций тромбоцитов необходимо для понимания механизмов тромбообразования и поддержания крови в жидком состо
Методика графической регистрации процесса свертывания крови (тромбоэластография)
Для работы необходимы: тромбоэластограф, скарификаторы, ватные шарики, спирт, специальный капилляр. Объект исследования–человек.
Методика регистрации процесса свертывания и рекальцификации плазмы с помощью коагулографии
Для работы необходимы: коагулограф, скарификаторы, ватные шарики, спирт, специальный капилляр, 1,29% раствор СаСL, цитратная плазма Объект исследования–чело
Определение времени свертывания крови по методу фонио
Определение времени свертывания крови по методу Ли и Уайта
Для работы необходимы: скарификаторы, ватные шарики, спирт, пробирка, секундомер. Объект исследования–человек.
Проведение работы:
Определение времени продолжительности кровотечения по методу Дюка
Для работы необходимы: скарификаторы, ватные шарики, спирт, пробирка, секундомер. Объект исследования–человек.
Проведение работы:
1. Здоровый мальчик 5 лет, неосторожно обращавшийся с ножом, порезал палец,
из которого течет кров. Сколько времени будет примерно длиться кровотечение?
A. Несколько секунд
Физиологические основы методов исследования групп крови
Мотивационная характеристика темы.Знание учения о группах крови необходимо для понимания принципов переливания крови и методов постановки проб совместимости перед переливанием.
Методика определения групп крови по системе АВО с помощью стандартных сывороток
Стандартные сыворотки – это очищенная в фабричных условиях плазма доноров разных групп крови, не содержащая фибриногена, с высокой концентрацией антител к одному или нескольким ант
Возможные Ошибки при определении групп крови
Отсутствие агглютинации может наблюдаться в следствие:
- ошибочного соотношения исследуемой крови и стандартной сыворотки
- слабого титра стандартных сывороток
Методика определения групп крови по системе аво с помощью цоликлонов
Цоликлоны анти-А и анти-В - это специфические иммуноглобулины, т.е. антитела (агглютинины) к групповым антигенам А и В, которые образуются одноклональными В-лимфоцитами в ответ на
Мероприятия, проводимые перед переливанием крови
1. Определение групповой совместимости крови реципиента и донора
2. Опредление индивидуальной совместимости крови реципиента и донора
3. Определение совместимости крови реципиента
Практические навыки по физиологии системы крови
Мотивационная характеристика темы. Закрепление практических навыков методов исследования функциональных состояний системы крови, примененяемых с целью диагностики и лечения в клини
Исследование вариабельности частоты сердечных сокращений в покое у здоровых людей с построением кривой нормального распределения данного признака
Известно, что частота сердечных сокращений определяется автоматической активностью различных отделов проводящей системы миокрада. В нормальных условиях главным водителем ритма является синоатриальн
насосная фунция сердца. сердечный цикл, методы его исследования
Мотивационная характеристика темы.Знание структуры сердечного цикла и механизмов его фаз необходимо для понимания процессов функционирования миокрада, обеспечивающего кровоснабжени
Определение длительности сердечного цикла у человека по пульсу в покое и при физической нагрузке
Частота сердечных сокращений у человека, находящегося в состоянии физического и эмоционального покоя, колеблется в пределах 60-80 уд./мин. При физической нагрузке частота сердечных
Оценка и анализ результатов электрокардиографии
Электрокардиограмма – это графическая запись разности потенциалов кардиомиоцитов, отражающая процесс распространения возбуждения по проводящей системе к миокарду. Основные компоненты ЭКГ – интервал
Исследование нервной регуляции деятельности сердца
Мотивационная характеристика темы.Знание механизмов регуляции деятельности сердца необходимо для понимания процессов функционирования миокрада в условиях действия различных нервных
Влияние рефлекса Данини-Ашнера на частоту сердечных сокращений у человека
У человека при надавливании на глазные яблоки частота сердечных сокращений может снижаться. Этот эффект объясняют рефлекторным возбуждением ядер блуждающего нерва.
Для работы необ
Исследование гуморальной регуляции деятельности сердца
Мотивационная характеристика темы.Знание механизмов регуляции деятельности сердца необходимо для понимания процессов функционирования миокрада в условиях действия различных гуморал
системное кровообращение. Законы гемодинамики, роль сосудов в кровообращении. Исследование артериального давления
Мотивационная характеристика темы.Знание основных принципов гемодинамики необходимо для обеспечения возможных путей поддержания гомеостаза в условяих различных функциональных состо
Измерение артериального давления у человека пальпаторным методом рива-роччи
Для работы необходим сфигмоманометр. Объект исследования–человек.
Проведение работы. Накладывают на плечо манжетку так, как указан
Измерение артериального давления (ад) у человека методом короткова
Величина АД–это один из показателей, по которому можно судить о работе сердца и состоянии сосудов организма. Аускультативный метод измерения АД по Короткову основывается на выслуши
Исследование регуляции кровообращения. Регуляция тонуса сосудов
Мотивационная характеристика темы.Знание механизмов регуляции артериального давления необходимо для понимания процессов подережания гомеостаза в условиях действия различных нервных
Исследование изменения артериального давления и частоты сердечных сокращений у человека при физической нагрузке
Физическая нагрузка влияет на деятельность сердечнососудистой системы, увеличивая, как правило, систолическое давление и частоту сердечных сокращений (ЧСС). Изменения этих показателей зависят как
Исследование изменения артериального давления и частоты сердечных сокращений у человека при воздействии холода
Сердечно-сосудистая система реагирует на любые воздействия внешней среды, в том числе и на температурные. В понятие метеочувствительности входят и реакции сердечно-
Исследование микроциркуляции и особенностей регионального кровотока
Мотивационная характеристика темы.Знание механизмов микроциркуляции и особенностей регионального кровотока необходимо для понимания процессов поддержания гомеостаза в условиях дейс
Наблюдение венозного кровотока
Основная функция венозной системы–это возврат крови к сердцу, поэтому кровь по венам течет в направлении от периферии к центру, к сердцу. Этому способствуют такие факторы, как ост
Исследование лимфообращения
Мотивационная характеристика темы.Знание механизмов функционирования лимфатической системы необходимо для понимания процессов метаболизма в тканях и динамической связи между клетка
Изучение стимулирующих влияний раздражения желудка у спинальной лягушки на работу ее лимфатического сердца
ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ УРОВНЯ знаний:
1. Куда необходимо провести катетер у животного, чтобы собрать лимфу из грудного лимфатического протока?
A.
практические навыки по физиологии системы кровообращения
Мотивационная характеристика темы.. Закрепление практических навыков методов исследования функциональных состояний системы кровообращения, примененяемых с целью диагностики и лечен
Общая характеристика системы дыхания. Анализ спирограммы
Мотивационная характеристика темы.Знание механизмов внешнего дыхания и анализ его показателей необходимы для понимания и оценки процесса дыхания при различных функциональных состоя
1. Исследование жизненной емкости легких с помощью спирометрии.
2. Исследование показателей внешнего дыхания с помощью спирографии.
Исследование жизненной е
Исследование внешнего дыхания. Исследование механизма вдоха и выдоха
Мотивационная характеристика темы.Знание механизмов вдоха и выдоха необходимо для оценки состояния органов дыхания во врачебной практике.
Цели занятия: зн
Исследование максимальной скорости вдоха и выдоха при форсированном дыхании (Пневмотахометрия)
Измерение максимальной скорости вдоха и выдоха при форсированном дыхании (пневмотахометрия) является простейшим методом диагностики нарушений проходимости бронхов и зависит как от силы дыхательной
исследование газообмена в легких
Мотивационная характеристика темы.Знание механизмов газообмена необходимо для понимания процессов метаболизма в тканях при различных функциональных состояниях и, в случае необходим
Определение парциального давления кислорода и углекислого газа в альвеолярном воздухе
ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ УРОВНЯ знаний:
1. Каково содержание растворенного кислорода в нормальной артериальной крови?
A. 0.9-1,4 об%
B. 1.5
Транспорт газов кровью, значение для организма
2. Роль гемоглобина и миоглобина в дыхании.
3. Кривая диссоциации оксигемоглобина. Факторы, влияющие на образование и диссоциацию оксигемоглобина.
4. Кислородная емкость крови, ме
D. Возникновению деструкции тканей
E. Ведёт к развитию гипоксии тканей
2. Показателем, отражающим положение кривой диссоциации оксигемоглобина, является…
A. РO2 при 100% на
E. Все ответы неправильные
Ответы: 1-B. 2-C. 3-D. 4-C. 5-C. 6-C. 7-C. 8-A. 9-D. 10-C.
Ситуационные задачи:
1. У больног
исследование нервной регуляции дыхания
Мотивационная характеристика темы.Знание механизмов регуляции дыхания необходимо для понимания процессов функционирования системы дыхания в условиях действия различных нейрогенных
исследования гуморальной регуляции дыхания
Мотивационная характеристика темы.Знание механизмов регуляции дыхания необходимо для понимания процессов функционирования системы дыхания в условиях действия различных гуморальных
E. уменьшится глубина и частота дыхания
Ответы: 1-D. 2-B. 3-A. 4-C. 5-D. 6-D. 7-C. 8-A. 9-D. 10-C.
ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ УРОВНЯ знаний по программе «Крок»
1. Какое
практические навыки по физиологии системы дыхания
Мотивационная характеристика темы.. Закрепление практических навыков методов исследования системы дыхания, примененяемых с целью диагностики и лечения в клинике является необходимы
Энергетический обмен
Конкретные цели:
1. Делать выводы об интенсивности метаболизма на основе анализа энергетических затрат, характеризующих основной обмен.
2. Делать выводы о преобла
энергетический и основной обмен и методы его исследования
Мотивационная характеристика темы.Знание процессов метаболизма и методов его определения необходимо для понимания единства и уравновешенности анаболических и катаболическх процессо
Исследование состояния обмена веществ человека по анализу индекса массы тела
Избыточная масса тела–один из факторов риска для здоровья. Интенсивность этого фактора возрастает от 4% при удовлетворительной адаптации до 52% при неудовлетворительной адап
Терморегуляция
1. Анализировать температуру тела гомойотермных организмов и делать выводы о механизмах регуляции баланса между теплообразованием и теплоотдачей.
2. Анализировать состояние терморегуляции
температура тела и регуляция ее постоянства
Мотивационная характеристика темы.Знание механзмов терморегуляции необходимо для понимания процессов поддержания гомеостаза в организме человека, обеспечивающих нормальный уровень
Исследование наличия тепловых и холодовых рецепторов кожи
Терморецепторы расположены в коже глубже, чем тактильные. Холодовые раздражения воспринимаются колбами Краузе, тепловые – тельцами Руффини. Плотность их расположения: 10-13 холодовых и 1-2 тепловых
Система пищеварения
Конкретные цели:
1. Трактовать понятия системы пищеварения и механизмы регуляции ее физиологических функций – секреторной, моторной, всасывательной.
2. Делать выв
Исследование порогов вкусовой чувствительности
Различают четыре «первичных» вкусовых ощущения: сладкое, кислое, соленое, горькое. Порог вкусовой чувствительности–это минимальная концентрация исследуемого вещества, которая выз
Исследование вкусовых полей языка
Для работы необходимы: 10% раствор сахара, 10% раствор NaCl , 1% раствор лимонной кислоты, 0,5% раствор гидрохлорида хинина, глазная пипетка, стакан с водой. Объект исследовани
Исследование преваривающего действия слюны на крахмал
Для работы необходимы: 6 мл слюны человека, 1% раствор крахмала сырого и вареного, реактивы Фелинга II, водяная баня, 6 пробирок, спиртовка, стакан с водой. Объект исследования
Пищеварение в желудке. Методы исследования пищеварения в желудке
Мотивационная характеристика темы.Знание механизмов пищеварения в полости желудка необходимо для понимания механизмов функционирования системы питания при различных функциональных
Оценка секреторной функции желудка по результатам анализа желудочного сока
Для работы необходимы: результаты исследования желудочного сока человека. Объект исследования–человек.
Проведение работы: Использу
Тестовые задания для самоконтроля уровня знаний
1. Больному была произведена резекция желудка с удалением пилорического отдела. Какие процессы в ЖКТ были нарушены?
A. Переход химуса в двенадцатиперстную кишку
B. Перистальт
Пищеварение в двенадцатиперстной кишке (ДПК). Роль поджелудочного сока и желчи в процессах пищеварения
Мотивационная характеристика темы.Знание механизмов пищеварения в двенадцатиперстной кишке необходимо для понимания механизмов функционирования системы питания при различных функци
Исследование эмульгирования жиров
За сутки у человека отделяется 1000-1500 мл желчи, одной из функций которой является эмульгирование жиров, делая водорастворимыми жирные кислоты.
Для работы необхо
Пищеварение в кишках. Физиологические основы голода и насыщения
Мотивационная характеристика темы.Знание механизмов пищеварения в кишках необходимо для понимания механизмов функционирования системы питания при различных функциональных состояния
Программа практической работы на занятии
1. Построение контура регуляции процессов голода и насыщения.
ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ УРОВНЯ знаний:
1. У больного нарушен синтез энтерокиназы. Как
моторная деятельность желудка и кишек. Процессы всасывания
Мотивационная характеристика темы.Знание механизмов всасывания и моторной деятельности органов желудочно-кишечного тракта необходимо для понимания механизмов функционирования систе
Программа практической работы на занятии
1. Построение контура регуляции постоянства состава питательных веществ во внутренней среде организма.
ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ УРОВНЯ знаний:
1. У
Практические навыки по физиологии системы пищеварения
Мотивационная характеристика темы. Закрепление практических навыков методов исследования функциональных состояний органов системы пищеварения, примененяемых с целью диагностики и л
Система выделения
Конкретные цели:
1. Объяснить понятия системы выделения и механизмы регуляции гомеостаза при ее участии на основе анализа констант - объема циркулирующей крови, концентрац
общая характеристика и функции системы выделения. Роль почек в процессах выделения, механизм мочеобразования
Мотивационная характеристика темы.Знание механизмов мочеобразования необходимо для понимания функционирования системы выделения при различных функциональных состояниях, что обеспеч
Программа практической работы на занятии
1. Рассчитать скорость фильтрации в клубочках, используя данные раздаточного материала. Сделать вывод.
2. Определить величину реабсорбции воды в нефроне, используя данные раздаточного мате
регуляция функций почек
Мотивационная характеристика темы.Знание механизмов регуляции функций почек необходимо для понимания процессов функционирования системы выделения различных функциональных состояния
Программа практической работы на занятии
1. Составление контура регуляции процесса мочеиспускания.
При регуляции процесса мочеиспускания отрицательная и положительная обратные связи взаимодействуют, что обеспечивает эффективное о
роль почек в поддержании гомеостаза
Мотивационная характеристика темы.Знание механизмов поддержания гомеостаза почками необходимо для понимания процессов функционирования системы выделения при различных функциональны
Программа практической работы на занятии
1. Построение контура регуляции ренин-ангиотензин-альдостероновой системы.
ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ УРОВНЯ знаний:
1. В эксперименте на животных раз
E. Водной нагрузке и приеме острой пищи
10. В каком отделе нефрона в основном реабсорбируется глюкоза?
A. проксимальном
B. дистальном
C. собирательных трубочках
D. петле Генле
практические навыки по физиологии системы выделения
Мотивационная характеристика темы.Знание практических навыков исследования функционального состояния органов мочевыделительной системы необходимо для понимания механизмов функциони
E. 60-100 мл
Ответы: 1-D., 2-B., 3-B., 4-D., 5-C., 6-E., 7-C., 8-D., 9-C., 10-D.
Ситуационные задачи:
1. При заболева
Физиология крови
1. Общая характеристика системы крови, состав и функции крови.
2. Понятие о гемостазе, механизмы гемостаза и механизмы его регуляции.
3. Электролиты плазмы крови, их количество. О
Потенциал действия типичных кардиомиоцитов желудочков, механизм его возникновения, графическое изображение, физиологическая роль
8. Соотношения по времени ПД и одиночного сокращения миокарда.
9. Периоды рефрактерности во время развития ПД типичных кардиомиоцитов, их значение.
10. Сопряжение возбуждения и со
Метаболизм и терморегуляция
17. Источники и пути использования в энергии в организме человека.
18. Методы определения энергозатрат человека. Дыхательный коэффициент.
19. Основной обмен и условия его определе
Пищеварение
27. Дайте определение и опишите структуру системы пищеварения.
28. Перечислите основные функции пищеварения.
29. Перечислите этапы обработки пищи в ротовой полости.
30. Н
Выделение
68. Система выделения, ее функции. Особенности почечного кровотока.
69. Органы выделения – почки, легкие, кожа, желудочно-кишечный тракт.
70. Строение и функции структурно-функцио
Рисовать схемы контуров регуляции системного кровообращения при различных физиологических состояниях организма
21. Трактовать роль особенностей регионального кровообращения и его регуляции (легочного, коронарного, мозгового, брюшного) для обеспечения приспособительных реакцій
22. Оценивать состояни
Факторы, влияющие на правильность исследования лейкоцитов
Криоглобулинемия
Парапротеинемия
Нормобласты
Агрегаты тромбоцитов
Нелизированные эритроциты
Длительное хранение крови при комнатной температуре
Возраст Количество лейкоцитов
1 день 11.6 - 22.0
1 неделя 8.1.- 14.3
1 месяц 7.6 - 12.4
1 год 6.8 - 11.0
Взрослые 4.0 - 9.0
Методы определения количества лейкоцитов в крови .
- Подсчет количества лейкоцитов в счетной камере
- Подсчет лейкоцитов в гематологических анализаторах
Определение количества лейкоцитов в счетной камере.
Подсчет лейкоцитов под микроскопом проводят после лизирования эритроцитов в 100 больших квадратах счетной сетки и пересчитывают на 1 л крови, исходя из объема квадратов и разведения крови. Подсчет лейкоцитов должен быть произведен в течение 2-4 ч после взятия крови.
- При наличии в периферической крови ядросодержащих клеток красного ряд, они не лизируются и подсчитываются вместе с лейкоцитами. В этом случае, чтобы определить истинное количество лейкоцитов, из общего числа посчитанных клеток вычитают количество клеток красного ряда.
- Например: Общее количество лейкоцитов при подсчете в камере (или на анализаторе) -45х109/л. При подсчете лейкоцитарной формулы найдено, что на 100 лейкоцитов присутствует 50 эритробластов (нормобластов).
Рассчитываем истинное количество лейкоцитов в крови:
150 клеток - 45 х 109/л
100 клеток (лейкоциты) - X
Х =100*45*10/л /150 = 30*10/л
Таким образом, истинное число лейкоцитов в крови составляет 30 х109/л.
Основные источники ошибок при подсчете лейкоцитов в камере:
Неправильное соотношение объемов крови и уксусной кислоты, взятых в пробирку.
Неправильно подготовленный раствор уксусной кислоты (при концентрации большей, чем 5%, часть лейкоцитов может лизироваться, что приведет к занижению результата).
Длительное нахождение пробы при температуре выше 28°С, что может ускорить лизис лейкоцитов в образце и привести к занижению результата.
Неправильное заполнение камеры Горяева. Как и при подсчете эритроцитов, камеру необходимо оставлять на 1 минуту для оседания клеток.
Недостаточно хорошо отмытая после предыдущего определения камера Горяева. Оставшиеся в камере лейкоциты могут завышать результаты анализа.
Методы подсчета тромбоцитов
В счетной камере
Мазках крови
Гематологическом анализаторе
Каждая группа методов имеет преимущества и недостатки.
Подсчет тромбоцитов в камере достаточно точен, не требует для расчета количества эритроцитов. С другой стороны этот метод более трудоемкий, поскольку тромбоциты в нативном виде представлены мелкими и плохо контрастированными элементами. Недостаток метода - подсчет тромбоцитов в ближайшие часы после взятия крови.
Определение количества тромбоцитов в мазках крови значительно уступает по своей точности камерному методу или автоматическим счетчикам. Ошибки при подсчете в мазках крови могут быть обусловлены плохим качеством мазка и связанным с этим неравномерным распределением тромбоцитов, неточным определением количества эритроцитов крови. Существенное неудобство метода - необходимость одновременного подсчета тромбоцитов и эритроцитов в крови. Преимущество его - возможность исследования тромбоцитов в любое время, независимо от момента взятия крови.
Метод определения тромбоцитов с помощью гематологического анализатора позволяет достаточно точно определить количество тромбоцитов, их средний объем и распределение по объему.
Loading...